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原位雜交
實(shí)驗(yàn)原理
原位雜交技術(shù)（in situhybridization）是以標(biāo)記的核酸分子為探針，在組織細(xì)胞原位檢測(cè)特異核酸分子的技術(shù)。
使含有特異序列、經(jīng)過(guò)標(biāo)記的核酸單鏈即探針，在適宜條件下與組織細(xì)胞中的互補(bǔ)核酸單鏈即靶核酸發(fā)生雜交，再以自顯影或細(xì)胞化學(xué)方法對(duì)標(biāo)記探針進(jìn)行探測(cè)，從而在細(xì)胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。
染色體原位雜交實(shí)驗(yàn)的基本原理是利用特定標(biāo)記的已知堿基序列的核酸探針，依據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原理，與中期染色體玻片標(biāo)本中的同源 DNA 序列進(jìn)行雜交。
標(biāo)記可以用放1射性同位素（3H、35S、32P），然后進(jìn)行放1射自顯影；也可以用非放1射性的熒光素生物素、地1高辛，再用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察，即熒光原位雜交（fluorescent in situhybridization，F(xiàn)ISH）技術(shù)。
在酵母雙雜交系統(tǒng)中，BD與X蛋白融合，AD與Y蛋白融合，植物葉片原位雜交技術(shù)服務(wù)，如果X、Y之間形成蛋白-蛋白復(fù)合物，AD與BD會(huì)在空間上充分接近，重新構(gòu)成結(jié)構(gòu)域，啟動(dòng)報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄。擁有BD質(zhì)粒的酵母可以在某一缺陷培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，擁有AD質(zhì)粒的酵母菌可以在另一種缺陷培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，通過(guò)接合（mating）或共轉(zhuǎn)化使酵母同時(shí)擁有AD與BD質(zhì)粒。如果BD上的目的蛋白與AD上的誘餌蛋白存在相互作用，這樣的酵母可以在三缺及四缺的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，并啟動(dòng)β-半乳糖苷酶基因的轉(zhuǎn)錄。
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