原位雜交技術(shù)可以應用于以下場景:
組織中病毒DNA/RNA的檢測和定位。例如,染色體原位雜交,可以用于檢測EB病毒mRNA、人類狀瘤病毒和巨細胞病毒DNA等。
癌基因、抑癌基因及其他各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達及其變化的檢測。
檢測染色體的變化,如染色體數(shù)量異常和染色體易位等。
在植物基因組研究中的應用。例如,原位雜交,通過與特定基因序列的探針進行雜交,可以在植物染色體上定位到目標基因的位置,進而構(gòu)建遺傳圖譜,為植物育種和基因組研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
原位雜交技術(shù)是在一定的溫度和離子濃度下,使具有特異序列的單鏈探針通過堿基互補規(guī)則與組織細胞內(nèi)待測的核酸復性結(jié)合而使得組織細胞中的特異性核酸得到定位,原位雜交檢測,并通過探針上所標記的檢測系統(tǒng)將其在核酸的原有位置上顯示出來。經(jīng)特定標記的核苷酸鏈為探針,可與組織切片、細胞或染色體標本中的待檢DNA片段或mRNA進行雜交,然后顯示標記物,熒光原位雜交,從而分析待檢核酸的分布和含量。利用此項技術(shù)可研究各種基因在染色體上的定位,編碼某種蛋白質(zhì)的mRNA在胞質(zhì)中的表達。核酸原位雜交可根據(jù)其檢測物而分為細胞內(nèi)原位雜交和組織切片內(nèi)原位雜交;根據(jù)其所用探針及所要檢測核酸的不同又可分為DNA-DNA, RNA-DNA, RNA-RNA雜交。但不論哪種雜交都必須經(jīng)過組織細胞的固定,預雜交,雜交,沖等一系列洗步驟及自顯影或酶法顯色以顯示雜交結(jié)果。
我們在這兒介紹的是整胚原位雜交,不同于一般的在載片上對細胞和組織切片進行探針雜交及檢測的原位雜交,
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