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武漢貝科新肽科技有限公司
主營：原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
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基因法轉(zhuǎn)化洋蔥表皮細(xì)胞：
分別用70%乙醇和滅菌蒸餾水清洗金粉（直徑為1 μm），加入滅菌蒸餾水制成金粉懸浮液，取100 μL 放在含有1.0 cm2 洋蔥表皮的玻璃皿中，邊振蕩邊加入10 μL pCambia2301-GaMYB2-GFP質(zhì)粒，逐步加入40 μL 0.1 mol·L-1 亞精胺和100 μL2.5 mol·L-1 CaCl2，振蕩混勻。基因GDS-80轟擊時氦氣罐的氣壓為1 300 psi，取10 μL DNA 包裹好的微粒懸浮液加到基因中央，雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)，進(jìn)行轟擊，之后放置25℃避光過夜培養(yǎng)，使用ConfocalLaser激光共聚焦顯微鏡觀察。
雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)是一種在生物學(xué)領(lǐng)域中廣泛應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。該技術(shù)利用熒光標(biāo)記的兩個分子，通過熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）原理，檢測兩個分子之間的相互作用。下面將詳細(xì)介紹雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)的原理、實(shí)驗(yàn)步驟、應(yīng)用和發(fā)展趨勢。
雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)的原理
雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)是基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）原理的。當(dāng)兩個熒光基團(tuán)在一個緊密的空間內(nèi)相互靠近時，一個熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光能量會被另一個基團(tuán)吸收，導(dǎo)致第二個基團(tuán)也發(fā)射熒光。這種熒光能量轉(zhuǎn)移現(xiàn)象稱為熒光共振能量轉(zhuǎn)移。通過檢測兩個熒光基團(tuán)之間的能量轉(zhuǎn)移效率，可以推斷出兩個分子之間的距離和相互作用情況。
蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位的研究方法
1、融合報告基因定位法
將綠色熒光蛋白（GFP）及其衍生蛋白、β-葡萄糖苷酸酶（GUS）等報告基因，與目標(biāo)蛋白基因融合在一起，由目標(biāo)蛋白的引導(dǎo)信號進(jìn)行亞細(xì)胞定位，對報告蛋白的光信號進(jìn)行跟蹤和觀察，從而確定目標(biāo)蛋白的定位。該方法是目前使用廣泛的蛋白質(zhì)亞細(xì)胞定位研究方法。
2、熒光標(biāo)記定位法
將反應(yīng)與化學(xué)光學(xué)信號相結(jié)合，通過特異性的熒光標(biāo)記與目標(biāo)蛋白（抗原）結(jié)合，通過熒光信號檢測，確定目標(biāo)蛋白的亞細(xì)胞位置。目前標(biāo)記信號不局限于熒光素，還有同位素、酶、膠體金顆粒、納米金屬顆粒等。
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第2年
