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武漢科銳諾生物科技有限公司

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植物RNA原位雜交測試服務(wù)-科銳諾生物

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分子病理應(yīng)用的檢測樣本主要包括石蠟組織、新鮮組織、脫落細(xì)胞、全血及其他體液等。石蠟切片標(biāo)本厚度應(yīng)在4-6μm,切片數(shù)量依據(jù)組織大小而定。樣本質(zhì)量對檢測結(jié)果和分析至關(guān)重要,病理醫(yī)師需要對可評估的樣本進(jìn)一步明確病理診斷,并評價(jià)標(biāo)本有無出血、壞死和不利于核酸檢測的前處理(例如含HCl脫鈣液處理),病變細(xì)胞(如細(xì)胞)的總量和比例,避免假陰性。進(jìn)行NGS檢測前需通過病理診斷明確其的性質(zhì)及含量,根據(jù)不同類型選擇合適的基因panel測序。組織標(biāo)本中細(xì)胞含量建議達(dá)到20%以上,低于此標(biāo)準(zhǔn)可富集后檢測。未經(jīng)病理評估的基因檢測結(jié)果不可單獨(dú)用于分子病理臨床診斷目的。

原位雜交天

1. 重新水化和固定

1) 吸取固定好的胚胎,加入50%的PBST溶液,放置5分鐘。

2) 置換成30%的PBST溶液,放置5分鐘

3) 置換成PBST溶液,放置5分鐘,重復(fù)一次

4) 置換成4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘5) 用PBST洗兩次,每次放置五分鐘,室溫。

蛋白酶處理與后固定(本實(shí)驗(yàn)不做此步)

1) 用10ul/ml的蛋白酶K在室溫下處理胚胎。5體節(jié)以下的胚胎不處理,5體節(jié)到24小時(shí)的胚胎處理3分鐘,24小時(shí)以上的胚胎處理5分鐘或者更長。發(fā)育時(shí)間越短的胚胎越嫩,可以不用或者少用蛋白酶處理,發(fā)育時(shí)間長的胚胎就需要用蛋白酶來疏松組織,以便于雜交。

2) 用PBST溶液輕洗,在PBST中放置5分鐘。

3) 用4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘,室溫。

4) 用PBST洗兩次,每次放置五分鐘,室溫。

2. 預(yù)雜交

1)每個(gè)管中置換成大約300ulHYB-溶液,60℃水浴5分鐘,避免振蕩。

2)用等體積的HYB+取代HYB-。

3)60℃水浴,預(yù)雜交4小時(shí)以上。

3. 雜交

1)吸去預(yù)雜交的HYB+,加上100ul已加入探針的HYB+溶液(探針濃度約為1ng/ul)..

2)60℃ 溫浴過夜。注:雜交與預(yù)雜交的溫度可以是55到60度不等,溫度越低,探針結(jié)合越好,溫度越高,背景越小。

原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交,從而對特定核酸順序進(jìn)行精1確定量定位的過程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。

原位雜交的特點(diǎn)是雜交在顯微鏡載玻片上中期染色體標(biāo)本上進(jìn)行。所謂原位即指標(biāo)本上DNA原位變性,在利用放1射性或非放1射性標(biāo)記的已知核酸探針雜交后,植物RNA原位雜交測試服務(wù),通過放1射自顯影或非放1射性檢測體系來檢測染色體上特異DNA或RNA順序,可用放1射性顆粒在某條染色體的區(qū)帶出現(xiàn)的頻率或熒光的強(qiáng)弱來確定探針的位置,從而進(jìn)行準(zhǔn)確的基因定位。

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